Gram négatif

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Les bactéries à Gram négatif sont mises en évidence par une technique de coloration appelée coloration de Gram. Les bactéries à gram négatif apparaissent alors roses au microscope. La technique de coloration repose sur les caractéristiques membranaires et de paroi de la bactérie. La coloration de Gram est un facteur déterminant dans la taxonomie (classification) bactérienne.Des bactéries gram - (Escherichia coli)
Gram négatif

Les bactéries à Gram négatif sont mises en évidence par une technique de coloration appelée coloration de Gram. Les bactéries à gram négatif apparaissent alors roses au microscope. La technique de coloration repose sur les caractéristiques membranaires et de paroi de la bactérie. La coloration de Gram est un facteur déterminant dans la taxonomie (classification) bactérienne.Des bactéries gram - (Escherichia coli)

Principe de coloration des Gram négatif

Après fixation des bactéries sur une lame (deux méthodes possibles : fixation à l'éthanol à 90° ou par passage de la lame dans la flamme, dite frottis) :
- La lame est plongée dans un premier colorant : le violet de gentiane. Le violet de gentiane est un colorant puissant, (toxique et cancérigène). Il va traverser les parois et membranes des bactéries et se fixer dans leurs cytoplasmes. Ainsi à cette étape toutes les cellules sont colorées en violet.
- La lame est ensuite traitée au lugol (diiode) en solution qui sert de mordant : il va renforcer le violet de gentiane contenu dans le cytoplasme des bactéries.
- On chasse ensuite le violet avec une solution d'éthanol à 90°. Cette étape est cruciale car permet de discriminer les bactériesGram négatif des bactéries Gram positif. Le principe est le suivant : les bactéries Gram négatif possèdent une paroi pauvre en peptidoglycane, composant qui en raison de sa faible quantité va permettre a l'alcool d' emporter le violet de gentiane, celui-ci disparaissant du cytoplasme. La bactérie est donc décolorée (pour plus d'information, voir les caractéristiques des bactéries Gram négatif).
- La lame, après avoir été rincée, est plongée brièvement dans un deuxième colorant, la fuchsine. Ce colorant traverse toutes les parois et membranes et va colorer en rose toutes les bactéries qui ont été décolorées durant l'étape précédente ; les bactéries gram positif étant colorées en violet (plus sombre) n'apparaîtront pas rose (plus clair). La lame est ensuite récupérée, rincée et séchée, puis observée au microscope optique généralement à l'objectif x100 + huile à immersion. Les bactéries Gram négatif apparaîtront en rose. L'observation de leur couleur est généralement accompagnée de descriptions structurelles (ex. bacille ou coque).

Caractéristiques des bactéries Gram négatif

Description de l'enveloppe

Les bactéries Gram négatif ont une structure qui s'organise en trois grandes parties : (de l'extérieur vers l'intérieur)
- La membrane externe = la paroi
- L'espace périplasmique et peptidoglycane
- La membrane plasmique La membrane externe est en contact direct avec le milieu extérieur. Elle est principalement composée de phospholipides organisés en bicouche (partie hydrophile à l'extérieur et partie lipophile à l'intérieur) mais contient aussi de nombreuses protéines intrinsèques, notamment les protéines de transports appelées porines. Beaucoup de Gram négatif (ex. Salmonella) possèdent aussi un composé non protidique appelé lipopolysaccharide ou LPS ; ce composé peu immunogène, dont le pouvoir pathogène (lipide A) est inclus dans la membrane externe, s'active lors de la lyse de la bactérie. La membrane externe est reliée au peptidoglycane par la lipoprotéine de Braun. L'espace périplasmique est un espace de stockage d'enzymes, de nutriments... Il a beaucoup d'autres fonctions, notamment dans certaines étapes de la synthèse de protéines et dans le métabolisme. Il se situe entre la membrane externe et la membrane plasmique et il contient une couche de peptidoglycanes. La couche de peptidoglycane (appelé aussi muréine) est relativement mince chez les Gram négatif contrairement aux Gram positif. La membrane plasmique est semblable à la membrane externe (excepté le LPS). Elle possède des protéines poreuses aboutissant dans l'espace périplasmique (synthèse de protéine). La membrane plasmique contient de nombreux autres complexes protéiques d'une importance vitale pour la bactérie (comme l'ATP synthase) qui ont des rôles prépondérants dans le métabolisme bactérien.

Exemples de bactéries Gram négatif

-Famille des Enterobacteriaceae :
- Genre Salmonella
- Espèce Escherichia coli
- Espèce Yersinia pestis (responsable de la peste)
-Famille des Vibrionaceae :
- Espèce Vibrio cholerae (responsable du choléra)
-Famille des Pseudomonadaceae :
- Genre Pseudomonas
-Famille de Neisseriaceae
-Espèce Neisseria meningitidis (responsable de la méningite bactérienne)

Voir aussi

- Gram positif.
- Les mycobactéries : une exception car non colorable par la méthode de Gram car acido-alcoolo-résistantes. ::Voir coloration de Ziehl-Neelsen. Catégorie:Bactériologie Gram
- br:Gram-nann cs:Gramnegativní bakterie en:Gram-negative es:Bacteria Gram negativa fi:Gramnegatiivinen bakteeri id:Gram-negatif it:Gram - nl:Gram-negatieve bacteriën no:Gram-negative pl:Bakterie Gram-ujemne ru:Граммотрицательные бактерии sl:Gramnegativne bakterije uk:Грам-негативні бактерії vi:Gram âm zh:革蘭氏陰性菌
Sujets connexes
Adénosine triphosphate   Bacille (forme)   Cellule (biologie)   Choléra   Coloration de Gram   Coloration de Ziehl-Neelsen   Cytoplasme   Enterobacteriaceae   Enzyme   Escherichia coli   Gram positif   Immunogène   Lipopolysaccharide   Lugol   Membrane (biologie)   Microscope   Méningite   Métabolisme   Neisseria meningitidis   Nutriment   Paroi bactérienne   Pathogène   Peptidoglycane   Peste   Phospholipide   Porine   Pseudomonas   Salmonella   Synthèse   Vibrio cholerae   Vibrionaceae   Yersinia pestis  
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